ABSTRACT
Three experiments were carried out with the objective of achieving high effectiveness in calli induction from high heterozygosis leaf explants of Coffea arabica through indirect somatic embryogenesis. A randomized-block design in a 2x5 factorial arrangement made up of two media [BOXTEL & BERTHOULY (1996) and TEIXEIRA et al. (2004)] and five C. arabica genotypes were used in the first experiment. In the second experiment the embryogenic calli production potential was evaluated in ten genotypes. Each of them was considered as a treatment. In the third experiment the variations in both 2.4-D (2.5 e 20µM) and 2-iP (2.5 e 20µM) concentrations in TEIXEIRA et al. (2004) medium and secondary media were evaluated. Crops were kept in a growth room under darkness, at 25±2oC. The medium described by TEIXEIRA et al (2004) was found to be superior when compared to that described by BOXTEL & BERTHOULY (1996) in the 2.2 and 7.2 genotypes. An opposite behavior was noticed in 4.2 genotype, that is, BOXTEL & BERTHOULY (1996) had medium superiority. Both 3.0 and 5.0 genotypes had the same behavior in both media studied, which shows that the somatic embryo production depends on the genotype. Calli induction depends on the 2-iP and 2.4 D ratio. The 20.0µM of 2.4-D and 20.0µM of 2-iP combination caused the highest embryogenic calli induction rate.
Visando a alcançar alta eficiência na indução de calos a partir de explantes foliares de plantas matrizes de C. arabica com alta heterozigose, por meio da embriogênese somática indireta, foram instalados três experimentos. O primeiro experimento foi conduzido em esquema fatorial 2x5, constituído de dois meios de cultura (BOXTEL & BERTHOULY, 1996 e TEIXEIRA et al., 2004) e cinco genótipos de C. arabica. No segundo experimento, foi avaliado o potencial de produção de calos embriogênicos em 10 genótipos, sendo cada genótipo considerado como um tratamento e, no terceiro experimento, foram avaliadas as variações nas concentrações de 2.4-D (2,5 e 20µM) e 2-iP (2,5 e 20µM) nos meios primário e secundário de TEIXEIRA et al. (2004). As culturas foram mantidas a 25oC, sob obscuridade. Para os genótipos 2.2 e 7.2, verificou-se a superioridade do meio de cultura Teixeira et al. (2004) em relação ao meio BOXTEL & BERTHOULY (1996). No genótipo 4.2, observou-se o comportamento inverso, ou seja, a superioridade do meio BOXTEL & BERTHOULY (1996). Os genótipos 3.0 e 5.0 apresentaram o mesmo comportamento em ambos os meios de cultura estudados, evidenciando que a produção de embriões somáticos é fortemente dependente do genótipo. A indução de calos depende da relação de 2-iP e 2.4-D. A combinação de 20.0µM of 2.4-D e 20.0µM of 2-iP promoveu a maior porcentagem de indução de calos embriogênicos.
ABSTRACT
A técnica da biobalística foi utilizada com o objetivo de adaptar um protocolo para transformaçäo de plantas de cupuaçu. Segmentos foliares de cupuaçu foram bombardeados com um plasmídio contendo o gene reportador da antocianina, utilizando-se as pressöes de hélio de 650, 1000 e 1100psi. Após o bombardeamento, os explantes foram transferidos para meio MS por 24 horas e, após este período de incubaçäo, pontos vermelhos foram detectados utilizando-se um estereomicroscópio Stemi SV11 Zeiss (Germany). A expressäo do gene da antocianina foi observada nas pressöes de 650 e 1000psi, entretanto necroses foram encontradas na pressäo de 1100psi. Demonstrou-se que os genes C1 e RÆ da síntese de antocianina, sob o controle do promotor 35S, podem ser utilizados como repórteres para o monitoramento dos eventos de transformaçäo em cupuaçu.